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2021-07-27
Westernblot實(shí)驗(yàn)過程中常見問題匯總及處理方案。1、westernblot的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)答：優(yōu)點(diǎn)：靈敏，特異性高，常規(guī)可達(dá)ng級(jí)，Ecl顯色法理論上可達(dá)pg級(jí)。缺點(diǎn)：通量有限。2、為什么我的細(xì)胞提取液中沒有目標(biāo)蛋白？答：原因有很多：首先排除WB過程是不是抗體的問題，重新實(shí)驗(yàn)、更換抗體；其次排除蛋白是否降解，提取的時(shí)候需要加入蛋白酶抑制劑，a)你的細(xì)胞中不表達(dá)這種蛋白質(zhì)，換一種細(xì)胞；最后考慮此種細(xì)胞是否表達(dá)該蛋白，表達(dá)量高低。3、提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？答...2021-07-27
染色質(zhì)免疫沉淀（chromatinimmunoprecipitationassay,ChIP）是目前研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對(duì)目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。ChIP不僅可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。而...2021-07-27
分子生物學(xué)主要研究具體生物大分子在某一生物學(xué)行為過程中的表達(dá)變化、功能和作用方式；主要涉及基因的表達(dá)調(diào)控、蛋白相互作用、信號(hào)分子間的交互對(duì)話等。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常需要我們在具體實(shí)驗(yàn)前對(duì)所關(guān)注的基因的一些基本信息、可能受哪些因素調(diào)控、與哪些分子可能存在潛在的相互作用，可能參與哪些生物學(xué)行為等進(jìn)行一些初步的判斷，然后根據(jù)這些信息，提出合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，并通過生物學(xué)實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。那么，如何獲得上面的這些信息，除了根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供的線索和深入研究相關(guān)文獻(xiàn)以外，還會(huì)用到一些分子生物學(xué)數(shù)據(jù)庫...2021-07-26
RT-PCR，逆轉(zhuǎn)錄PCR或稱反轉(zhuǎn)錄PCR（ReverseTranscriptionPCR），是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT-PCR中，RNA在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下被逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)DNA（complementaryDNA，cDNA），再以此為模板通過PCR進(jìn)行DNA擴(kuò)增?；驹恚河媚孓D(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成與其互補(bǔ)的DNA（cDNA）的過程。因?yàn)閙RNA末端存在PolyA，所以用OligodT作為通用引物與其互補(bǔ)。商品化的反轉(zhuǎn)錄試劑盒里通常除了OligodT之外，...2021-07-23
對(duì)于冰箱，我們并不陌生，現(xiàn)在幾乎家家戶戶都有冰箱，這是一種常用家電，而防爆冰箱主要應(yīng)用在石油、化工、軍事、醫(yī)藥、科研、實(shí)驗(yàn)室等領(lǐng)域，屬于特種冰箱。實(shí)驗(yàn)室防爆冰箱用于儲(chǔ)存易燃、易爆、易蒸發(fā)、易腐蝕等化學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)試劑等，適用于高校各實(shí)驗(yàn)室、科研單位的實(shí)驗(yàn)場所等，就是為了防止爆炸引起的人員或者財(cái)產(chǎn)上的損失。美菱生物醫(yī)療2~8℃防爆冰箱產(chǎn)品特點(diǎn)：全面防靜電：箱殼與內(nèi)襯、門殼及門內(nèi)襯均采用銅絞線連接，存儲(chǔ)空間內(nèi)各活動(dòng)部件均為金屬制作。多種防爆方式：整機(jī)防爆，采用隔爆型、本質(zhì)安全型及澆...2021-07-23
通常我們會(huì)將實(shí)驗(yàn)室的純水分為四個(gè)不同的等級(jí)，按照級(jí)別分為：純水、去離子水、實(shí)驗(yàn)室Ⅱ級(jí)純水以及超純水。這四類不同的純水通常根據(jù)電導(dǎo)率來進(jìn)行區(qū)分和檢測。1、純水純水也叫純化水，它的電導(dǎo)率會(huì)在1-50μs/cm之間，它可經(jīng)由單一弱堿性陰離子交換樹脂、反滲透或單次蒸餾制成。一般應(yīng)有在玻璃器皿清洗、清洗劑用水、恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)室和高壓滅菌器之間。2、去離子水去離子水的電導(dǎo)率通常都在1.0-0.1μs/cm之間，通過采用含強(qiáng)陰離子交換樹脂的混床離子交換制成。它們能夠滿足各種制備試劑、稀釋樣品...2021-07-22
養(yǎng)細(xì)胞這件事兒，看似簡單，然而卻常常因?yàn)楦鞣N原因，讓我們珍貴的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞一再受損或者死亡，今天為大家講述細(xì)胞從復(fù)蘇、傳代到凍存等一系列過程及常遇到的那些你可能忽略的小卻重要的細(xì)節(jié)。一、細(xì)胞的營養(yǎng)來源針對(duì)大多數(shù)腫瘤細(xì)胞，營養(yǎng)配方一般為：90%合成培養(yǎng)基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS)；為了防止污染，可以加1%雙抗！不同細(xì)胞的培養(yǎng)基是不同的。一般ATCC購買的細(xì)胞，針對(duì)不同細(xì)胞株，會(huì)有詳細(xì)介紹，包括生長的狀態(tài)圖、培養(yǎng)基的類型等。培養(yǎng)基一般都是偏紅色...- 移液器
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